D'IMMUNISATION EN UN TEMPS PAR LE VACCIN DE SORDELLI
LE VACCIN ANTIDIPHTÉRIQUE DE SORDELLI
La préparation du vaccin de SoRDELLI repose, nous le rappelons, sur les recherches de ScxMipT qui, le premier, a songé à purifier et concentrer l’anatoxine par adsorp- * tion sur l'hydrate d'aluminium, suivant le principe général et la technique indiqués par WILLSTAETTER au cours de ses recherches sur les diastases.
Nous décrirons, avec quelque détail, les divers temps de préparation de ce vaccin d’après le travail original de SORDELLI.
Préparation de la toxine.
On utilise, comme milieu de culture, une macération de viande de veau peplonée à 2 pour 100 (peptone Park et Davis) et glycosée à 1 pour 100 (pH=s8,3-8,4).
Le bacille diphtérique utilisé est naturellement le bacille « américain » (PARK et WiLLraMs n° 8).
, Les cultures sont maintenues à l’étuve à 35° pendant
PE TAIEER
Pa Das =
huit jours et filtrées sur bougie Berkefeld avant d’être
soumises à un premier essai de titration en unités antigéniques.
En
Transformation en anatoxine.
La transformation en anatoxine se fait, selon la méthode de RAMOoN, par l’action combinée et prolongée du formol et de la chaleur. Pour obtenir l’atoxicité complète, SORDELLI utilise le formol du commerce à 40 %, dans la proportion de 6 pour 1.000, le milieu étant ajusté à environ pH =—8. La préparation reste à l’étuve, à 37-38° pendant quinze jours.
L’anatoxine obtenue dans ces conditions possède un pouvoir antigène dont on détermine la valeur :
a) par la réaction de floculation ;
b) directement, par l’immunisation du cobaye au moyen
de doses différentes et progressives ; :
c) par la recherche de la quantité d’antitoxine contenue dans le sérum de chaque cobaye injecté (méthode d'EHRLICH-RAMON).
On ne retient, pour la préparation du vaccin, que les
anatoxines dont le pouvoir antigène est suffisant.
En moyenne, 1 cm? d’une bonne anatoxine immunise les cobayes au point qu’ils survivent à 60 Dim de toxine diphtérique, trente jours après la vaccination.
L’anatoxine obtenue, on s’assure, avant de la purifier, qu’elle est parfaitement inoffensive. A cet effet, on injecte à des cobayes de 300 grammes, 5 cm° d’anatoxine, à d’autres cobayes de poids égal, 10 cmÿ. Ces cobayes sont maintenus dans de bonnes conditions d'alimentation et pesés tous les sept jours. L'épreuve est prolongée durant trente jours. L'augmentation de poids et l’absence de signes d’in-
MO Abe Tu toxication (amaïgrissement, parésie) immédiats ou lointains, signent l’innocuité de l’antigène.
Une fois les titrages terminés et l’innocuité reconnue, on passe à la purification de l’anatoxine par précipitation acide.
Purification par précipitation.
À 1.000 cm° d’anatoxine, on ajoute jusqu'à pH = 3,1 de l'acide sulfurique à 20 pour 100 (v/v). Il se forme, en vingt minutes environ, un précipité que l'on sépare par centrifugation. Ce précipité contient tout l’antigène. Lavé à l’eau distillée, il se dissout dans l’eau amenée par adjonction de Na OH à pH — 7,5. La solution ainsi obtenue — l’élution de WiLLSTAETTER — est claire et rose. Son volume est 1/10 du volume initial — soit 100 cm°. Pour obtenir un liquide incolore, on ajoute une suspension d’alumine (forme y de la série C de WILLSTAETTER) dans la proportion de 3 mgr. par cm”, laquelle va adsorber les substances colorantes sans fixer à cette dose une quantité appréciable d’anatoxine.
Cette purification n'exclut pas la stérilisation de la préparation ainsi obtenue : elle est réalisée par filtration sur bougies Berckefeld, puis par chauffage à 57° pendant trente minutes.
SORDELLI insiste beaucoup sur cette stérilisation par une chaleur moyenne, qui à l’avantage de ne pas modifier la valeur de l’anatoxine.
Activation.
L’artifice de SORDELLI, qui va accroître considérablement la valeur antigène de l’anatoxine, est l’activation : pro-
