P04HK
» 4- eau conten* <
» + eau P04HK2 : 0.98 °/0 . . .
TRYPSINES D’ORIGINES DIVERSES.
L’action favorable du phosphate acide peut s’expliquer par la neutralisation qu’il exerce sur les bases ou les acides aminés formés au cours de la digestion. Bien que la tyrosine ou la leucine n’aient aucune influence nuisible sur la protéolyse de la levure, il existe cependant des corps paralysants parmi les produits de l’autolyse, qui se montrent sensibles à l’action du phosphate monopotassique.
Influence de l’extrait de levure et du PO‘H2K
SUR LA PROTÉASE DE l’hÉFANOL.
Liquides employés
Albumine digérée »/0
Autodigestion de l’héfanol dans l’eau ....
} Différence : 10.1
Id. dans solution P04H2K à 1.52 % . . .
Id. avec le produit de l’autolyse de l’héfanol
( Différence : 27.8
Id. du même + P04H2K.
Ainsi, comme on pouvait le prévoir, dans les produits de l’autodigestion de l’héfanol il se trouve des principes ralentissant l'action de l’enzyme protéolytique; mais ce qui est intéressant, c’est que le phosphate acide se montre à leur égard extrêmement actif. L’influence nuisible de l’extrait d’autolyse s’observe également avec le produit porté à 100°, et, dans ce cas, le phosphate acide agit encore très favorablement.
Le phosphate acide possède en outre la propriété très curieuse de régénérer la protéase altérée par l’action de la chaleur. C’est ce qui ressort des essais suivants : 1.5 gr. d’héfanol est additionné de 150 cc. d’eau et porté à différentes températures. On abandonne ensuite les divers échantillons à 50° pendant 27 heures. On voit qu’une chauffe de 1 m. à 100°, ou même à 75°, suffit pour détruire l’enzyme protéolytique. Cependant, si la chauffe se fait en présence de phosphate, ou même si l’on ajoute ce sel après l’action de la température, on obtient encore une digestion très nette.
ENDOTRYPTASE DE LA LEVURE
Régénération de la protéase par le POjH2K.
Liquides employés
Albumine digérée à 50»
après 27 heures
Î Mélange d’héfanol et d’eau porté 1 m. à 75°. Le même, mais en présence de 0.75 °/0 P04H-’K Le même, chauffé 1 m. à 75°, refroidi, et après, additionné de 0.75 °/0 P04H2K
iLe mélange est porté 1 m. à 100°
Le même, porté à 100°, en présence de 0.75
% de phosphate
Le même, refroidi et additionné de phosphate L’héfanol est traité par de l’eau bouillante, bouilli ensuite 2 m., refroidi à 50° et additionné de phosphate
La régénération de la protéase ne provient donc pas de ce fait que la présence du phosphate a élevé la température de destruction, puisque l’addition postérieure de ce sel exerce la même action que l’addition pendant le chauffage. On peut donc conclure de ces essais qu’un enzyme qui, tout en ayant perdu son pouvoir protéolytique, a conservé encore sa structure propre, caractéristique de sa substance active, peut être régénéré par le phosphate, tandis que si l’on a détruit cette structure intime par un traitement énergique, comme dans le dernier essai (n°7), le phosphate n’agit plus. Dans ce dernier essai (n° 7), on voit, en outre, qu’il ne s’agit nullement de l’action du phosphate sur les albuminoïdes, mais bien d’une action directe de ce sel sur l’enzyme protéolytique.
Endotryptase de levure.
Dans le suc de levure obtenu par forte pression, suivant le procédé de Buchner, M. Hahn a constaté la présence d’un enzyme protéolytique, qu’il désigne sous le nom d 'endo-
TRYPSINES D’ORIGINES DIVERSES.
tryptase, en réservant le terme général d ' endoenzymes aux substances actives qui ne traversent pas les membranes cellulaires et qui exercent, par suite, une action intracellulaire. Le suc de levure de Buchner, qu’on obtient par pression, possède une densité de 1.027 à 1.057. Il contient 8.5 à 14 % de matières sèches et de 0.82 à 1.45 % d’azote total. Sur 100 parties d’azote total contenu dans le suc, 60 environ sont à l’état d'albumine coagulable. Le reste se trouve sous forme de dérivés correspondant |à une protéolyse très avancée. Pour 100 d’azote non-albumine on dose 30 précipitables par l’acide phosphotungstique et 70 non précipitables.
L’enzyme protéolytique de ce suc peut être isolé par précipitation à l’alcool. On ajoute à 1 partie de suc, 8 parties d’alcool absolu; le coagulum est lavé à l'alcool absolu, puis repris par l’eau, qui dissout seulement une partie du précipité. Le filtrat est traité de nouveau par 8 volumes d’alcool. Le précipité, après lavage à l’alcool, est desséché dans l’exsiccateur. Le produit qu'on obtient ainsi est loin d’être pur. Il contient, en outre de la diastase protéolytique, des quantités assez grandes d’invertine, dont il est difficile de se débarrasser. Le produit préparé par des précipitations répétées avec un mélange d’alcool et d’éther est généralement plus actif. On obtient ainsi une substance coagulable à l’ébullition dans l’eau, précipitable par l’acétate neutre de plomb, le nitrate de mercure, mais ne fournissant ni la réaction de Millon, ni celle du biuret.
Influence de la réaction de milieu, de l’alcool et de la glycérine. — L’endotryptase fournit le maximum d’effet dans un milieu acide. Dans le suc neutralisé et soumis à l’autolyse, l’albumine se digère beaucoup moins bien que dans le suc naturel, qui est toujours acide. Voici, résumées dans un tableau, les données relatives à l'influence de la réaction de milieu sur le travail produit par l’endotryptase :
( Voir tableau comparatif, page 439.)
ENDOTRYPTASE DE LA LEVURE
Influence de la réaction de milieu sur l’endotryptase.
Liquides employés
Albumine »/0 digérée après lï heures
A : Suc naturel lég* acide : témoin
» neutralisé avec de la soude
» » -(- 0.2 •/„ soude
B : Suc naturel lég* acide : témoin
» » + 0.05 »/» HCl
