DE PRÉCIPITATION

Numéros |

Solution

de

peptone

Eau

Solution de sulfate d’ammon.

Précipitation

Addition au liquide filtré de 0 2 cm3

de suif, d’ammoniaque

Remarques

2 cc.

pas de précipitât.

pas de trouble

léger trouble

léger trouble

précipité

Ie lim. inf.

précipité

liquide reste limp.

Ie lim. sup.

précipité

2° lim. inf.

liquide reste limp.

2® lim. sup.

précipité

3e lim. inf.

liquide reste limp.

3e lim. sup.

Dans l’essai n° 1, le liquide se compose de : 2 centimètres cubes de peptone, 7 centimètres cubes d’eau et 1 centimètre cube de sulfate d’ammonium saturé. La rubrique « précipitation » nous indique si le mélange reste limpide. La précipitation commence seulement dans le n° 3, et, par conséquent, la première limite inférieure correspond à 2,6 de sulfate. La précipitation provoquée, dans le n° 3, par le sulfate, est loin d’être complète. La rubrique « addition au liquide filtré », de la 6e colonne, nous indique que le liquide qui a été additionné

ETUDE DES ALBUMOSES.

de 2,6 cc. de sulfate, et débarrassé ensuite du précipité par filtration, donne un précipité nouveau si Ton ajoute 0,2 cc. de sulfate. Dans le n° 6, la rubrique «addition au liquide filtré» nous dit que la solution filtrée ne précipite plus à ce point; c’est donc 4,4 qui est la limite supérieure. Le liquide, débarrassé de la première fraction de précipité, par la filtration, commence à se troubler de nouveau en présence de 5,4 de sulfate. Entre la limite supérieure de la première précipitation et la limite inférieure de la suivante se trouve un intervalle, point neutre qui se constate de même entre les nos 9 et 11.

La méthode de précipitation fractionnée fournit, par conséquent, avec la peptone, trois fractions différentes, présentant chacune deux limites distinctes :

Après avoir été débarrassé de ces trois fractions, le liquide contient en solution encore des matières albuminoïdes, que Ton peut diviser en deux nouvelles fractions. La première est précipitée quand on acidifie le liquide, saturé, au préalable, de sulfate d’ammonium; la seconde reste en solution. On a donc, en définitive, partagé tous les produits d’hydrolyse pepsique en 5 fractionnements.

Pour opérer cette séparation sur une plus grande échelle, on procède de la manière suivante : on filtre tout d’abord la liqueur pour en séparer les matières non dissoutes. Puis on neutralise pour précipiter la syntonine, on fait bouillir pour coaguler les substances coagulables restantes et Ton amène le filtrat à une teneur d’environ 5 % de matières albuminoïdes; dans ce liquide, on produit alors la précipitation fractionnée par des doses croissantes de sulfate. Pour séparer la première fraction, on ajoute au liquide de digestion 1 volume de solution saturée de sulfate d’ammonium. On laisse reposer 24 heures; après quoi, on recueille le précipité sur un filtre. Ce précipité

lre fraction . .

2e fraction . .

3e fraction . .

Limite inférieure.

Limite supérieure,

PEPSINE

est lavé ensuite avec une solution de sulfate saturé à moitié, redissous dans l’eau et précipité de nouveau par les mêmes quantités de sel. Pour aboutir à des produits plus purifiés, on doit précipiter la substance à trois ou quatre reprises, en présence de la même quantité de sel.

Le liquide, débarrassé de la première fraction, est filtré; pour obtenir la deuxième fraction, on y ajoute 1/2 volume de solution saline; le précipité est lavé avec la solution saline saturée aux 2/3, redissous à diverses reprises dans l’eau, et chaque fois précipité en saturant le liquide aux 2/3. La troisième fraction s’obtient quand on sature, avec du sulfate d’ammonium en poudre, le liquide filtré, débarrassé de la deuxième fraction. La quatrième se précipite quand au liquide filtré de la troisième fraction on ajoute 1/10 de volume d’acide sulfurique dilué et saturé par le sulfate d’ammonium. Pour aboutir à un précipité complet, on laisse deux jours au repos le liquide acidulé; on lave le précipité avec une solution saturée et acidifiée, et on le purifie enfin dans des conditions analogues à celles de la purification des fractions précédentes. La cinquième fraction reste en solution dans le liquide débarrassé des quatre fractions précédentes. On désigne la première fraction sous le nom d’ albumo.se primaire; les fractions 2, 3, 4, sous les noms de deutéro-albumoses A, B, C ; la cinquième est considérée comme peptone.

Les cinq fractions séparées dans la peptone Witte se retrouvent également dans les produits d’hydratation de toutes les matières protéiques obtenues, soit par les acides, soit par les enzymes. Voici les limites de précipitation des quatre albumoses, d’après leurs différentes provenances.

( Voir tableau comparatif, page 227.)

L’intervalle entre la limite supérieure d’une fraction et la limite inférieure de la fraction suivante est partout très élevé, et ces limites ne peuvent pas être confondues. Par contre, les limites correspondantes diffèrent peu d’une substance à l’autre. Il n’y a que pour la limite inférieure de l’albumose primaire

ÉTUDE DES ALBUMOSES.

Limites de précipitation avec le SO4 (NH4)2