LES MATIÈRES ALBUMINOÏDES DU CRISTALLIN

Dans l’histoire des matières albuminoïdes, le sujet du présent chapitre est un des plus controversés.

La matière albumineuse, soluble dans l’eau, que le cristallin de bœuf contient, est-elle spéciale, distincte de l’albumine du sérum, de celle du blanc d’œuf, de la globuline et de la caséine ? ou bien faut-il l’identifier avec quelqu’une de ces substances, en les supposant elles-mêmes différentes ?

Cette matière est-elle unique? ou bien,, comme quelques auteurs l’admettent, le cristallin contient-il deux matières albuminoïdes solubles différentes et caractérisées ?

Enfin, la matière insoluble dont les fibres cristalliniennes sont formées est-elle particulière et est-elle de nature albuminoïde ?

Sur toutes ces questions, qui touchent de si près au problème de l’unité substantielle ou de la pluralité spécifique des matières albumineuses, les avis sont partagés. Il y a des affirmations nettes , reposant sur des expériences, d’un côté comme de 1 autre.

Pour analyser le cristallin, Berzélius le broie, ajoute à la pulpe de l’eau et filtre. La liqueur filtrée, limpide et incolore, réunie aux eaux de lavage, est coagulée par la chaleur; le coagulum est séparé par le filtre, et la nouvelle liqueur évaporée; le résidu de l’évaporation est successivement épuisé par l’alcool et par l’eau. Voici quelle a été la proportion, en centièmes, des produits ainsi séparés :

Matière particulière coagulable albumineuse . 35, 9

Membrane formant les cellules . 2>A

Extrait aqueux avec traces de sels .

Extrait alcoolique avec sels . 2>A

Eau . 58,0

Total . 100,0

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La matière albumineuse coagulable, Berzélius l’a distinguée comme particulière, en faisant observer « quelle diffère de la fibrine en ce quelle ne se coagule pas spontanément, et de l’albumine en ce que sa dissolution concentrée , au lieu de se prendre en une masse cohérente lorsqu’on la chauffe, devient grenue, absolument comme il arrive à la matière colorante du sang coagulée, dont elle ne se distingue que par son défaut de coloration. » Le célèbre chimiste ajoute encore, pour accentuer sa conviction : « Toutes ses propriétés chimiques sont les mêmes que celles de la matière colorante du sang, à laquelle elle ressemble même sous ce rapport que, quand on la traite par l’acide acétique, après l’avoir fait sécher, elle laisse une combinaison acide, peu soluble dans l’eau, tandis que la masse récemment coagulée se dissout aisément dans l’acide acétique, sans laisser de résidu. » Il a même fait une tentative qui, certes, nous paraîtrait étrange aujourd’hui : «Cette ressemblance, dit-il, m’a fait naître l’idée de cherchera produire la matière colorante du sang, en mêlant avec du chlorure ferrique et de l’ammoniaque la dissolution aqueuse non coagulée de la substance en question; mais je n’ai obtenu qu’une dissolution jaunâtre contenant du 1er W. »

La matière que Berzélius avait rapprochée de la matière colorante du sang a été étudiée, sous le nom de cristalline, comme une substance homogène, par MM. Mulder, Rüling et Lehmann; ce dernier a même tenté de l’isoler à l’état soluble. Quelques chimistes, à la suite de Berzélius, ont identifié la cristalline avec la globuline des hématies, en disant que celle-ci se trouve à l’état de pureté, exempte d’hématine, dans le cristallin^. Auparavant M. Fr. Simon avait même trouvé quelque analogie entre la globuline et la caséine; mais Berzélius faisait observer que ces matières ne peuvent pas être le même corps (1 * 3).

M- Fr. Simon a admis enfin qu’il existe deux matières solubles

(1) Berzélius , Traité de chimie, t. VII, p. 456, traduction Esslinger (i833).

m Berzélius, Rapport annuel , traduction Plantamour, t. II, p. 268.

(3) Ibidem, t. I, p. 317.

inégalement coagulables dans le cristallin, l’une qu’il désigne sous le nom d’albumine , l’autre à laquelle il conserve celui de cristalline Wv

M. Alexandre Schmidt a vu que la partie soluble du cristallin , étant traitée par l’acide carbonique, laisse précipiter une matière, pendant qu’une autre, restée en solution, est coagulable par la chaleur

MM. Fremy et Valenciennes ont nettement distingué deux matières solubles dans le cristallin de bœuf : l’une difficilement coagulable, l’autre semblable, quoique distincte de l’albumine ordinaire. Ces matières sont inégalement distribuées dans les couches superficielles molles et dans les couches centrales plus dures du cristallin. La première a été appelée métalbnmine. Les auteurs ont en outre appelé l’attention sur la matière des fibres cristalliniennes : elle ne décompose pas l’eau oxygénée, ce qui la distingue de la fibrine. Son analyse élémentaire la rapproche des matières albumineuses CSL

Dans les recherches de MM. Kuhne, Brücke et Panum, les choses paraissent beaucoup plus compliquées ; ce qui semble en ressortir de plus net , c’est que la portion de 1 a solution cristallinienne qui est précipitable par l’acide carbonique a été rapprochée de ce que dans le sang on a nommé paraglobine , paraglobuline , sérumcaséine, sérine

Pour M. Lieberkühn la chose est bien plus simple : la matière albuminoïde soluble du cristallin est, comme la caséine, de l’albuminate de potasse.

Enfin, selon M. von Vindschgau, il paraît bien y avoir, en apparence, des matières inégalement coagulables dans le cristallin; mais quand on opère dans les mêmes circonstances , l’albumine du sérum ou du blanc d’œuf et la matière soluble du cristallin pré-

(1) Ibidem, t. II , p. 269.

(s) Gradin, Handbuch, t. IV, p. 2275.

f3) Comptes rendus, t. XLIV, p. 1122.

*4) Gmelin, Handbuch, t. IV, p. 221 5, 2275.

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sentent les mêmes réactions et la même coagulabilité par la chaleur; toutes les différences s’effacent W.

Cette dernière opinion est celle qui tend à prévaloir. Dans le Dictionnaire encyclopédique des sciences médicales, article albumine, M. P- Schutzenberger s’exprime comme ceci : « La globuline du cristallin semble différer de l’albumine : 1“ parce quelle ne se coagule que vers 9 3°; 20 parce que les solutions se troublent sous l’influence' d’un courant d’acide carbonique et s’éclaircissent de nouveau lorsqu’on expulse le gaz carbonique par un autre gaz. Vindschgau a démontré que ces différences ne sont qu’apparentes et tiennent à la nature des substances étrangères mélangées et combinées. . . Ainsi M. Vindschgau a démontré l’identité de la globuline du cristallin et de l’albumine. »

En résumé, ce qui découle de ce rapide historique, c’est que, sauf ce qui est relatif à la composition élémentaire, tout, rapprochements et distinctions, repose sur l’application d’une propriété contingente, la coagulabilité, qui dépend. de conditions variées , et sur l’apparence ou la permanence du coagulum.

Je me propose de démontrer que le cristallin du bœuf contient, dans sa partie soluble, deux matières albuminoïdes et une troisième dans sa partie insoluble. Je confirme ainsi la manière de voir de M. Fremy; mais je crois avoir découvert que la substance qu’il a nommée métalbumine est une zymase , c’est-à-dire une substance qui possède quelque chose de l’activité fonctionnelle de la diastase. Quant à l’autre matière, qui est également à l’état soluble dans le cristallin, que M. Fremy a dû confondre avec l’albumine, elle n’en est pas réellement. J’ajoute que, si, sur ces deux points, mes conclusions diffèrent de celles de l’illustre chimiste , c est que l’état de la science m’a été plus favorable.

Je prie l’Académie de me pardonner le plan d’exposition que j’ai adopté et aussi mon instance sur les détails. Mais je voulais comparer, et les détails, dans l’espèce, sont si importants par les

’a) Jahreshericht von J. Liebig undH. Kopp, i85j, p. 533.

conséquences, que je n’ai pas pu me dispenser d’être long pour arriver à être, clair.

Avant d’entrer en matière, il est nécessaire de rappeler que l’albumine du blanc d’œuf de poule, dont le pouvoir rotatoire, relatif à la teinte sensible, peut varier de — 4o° à —43°, contient trois matières albuminoïdes distinctes par leurs pouvoirs rotatoires. L’une d’elles est une zymase capable de fluidifier l’empois de fécule. J’ai montré, en outre, que la caséine du lait ne pouvait être confondue avec aucune d’elles. Le sérum du sang de bœuf contient également une albumine spéciale dont le pouvoir rotatoire n’est pas au-dessous de — 6o° et, en outre, une zymase. Quant à la matière que, dans le globule sanguin du même animal, on nomme globuline, j’ai de bonnes raisons de croire quelle ne peut être confondue avec aucune des substances que je viens d’énumérer, ni , comme j’espère pouvoir l’établir, avec les matières albuminoïdes du cristallin.

Or, pour que les matières organiques des albumines solubles du cristallin puissent être identifiées, confondues avec celles-là , il faut nécessairement, c’est évident, qu’elles aient le même pouvoir rotatoire et possèdent d’ailleurs la même composition générale et les mêmes caractères de groupe qu’elles. Eh bien ! les matières cristalliniennes possèdent la composition élémentaire générale, et le caractère chimique albuminoïde, avec des pouvoirs rotatoires spécifiques nettement distincts et constants.

Les matières albumineuses solubles du cristallin de bœuf. — Les cristallins broyés, délayés dans l’eau, ont fourni une bouillie d’apparence laiteuse. La filtration en sépare un liquide incolore, que j’ai essayé d’obtenir aussi concentré que possible, pour pouvoir en prendre le pouvoir rotatoire , car il importait de s’assurer qu’avant tout traitement, la matière soluble du cristallin ne pouvait être confondue ni avec celle du blanc d’œuf, ni avec celle du sérum du sang. La liqueur est comme fluorescente , et des filtrations répétées la laissent toujours légèrement opaline. Néanmoins

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elle peut être facilement observée en se servant de l’appareil à pénombre. Les rotations ont été ramenées à ce qu’elles seraient pour la teinte de passage de l’appareil de Soleil. Deux observations, faites avec des cristallins différents, ont donné :

a?- = vi°,3'\, 1=2, u = 5cc, p=^o&r,28i, cendres 0^,009, [a]j = 47°, 2^; otj = 5°,85'\, 1 = 2,

p=bse, 3 1 1 , cendres 0^,008, [a]j^47°,o3'\.

Ces pouvoirs rotatoires sont probablement trop faibles quant aux matières albuminoïdes que la solution contient; en effet, p comprend les substances inactives que l’analyse de Berzélius fait pressentir. Mais tels qu’ils sont, ils montrent que la composition de la partie soluble est sensiblement constante. Ils font voir aussi que le mélange, s’il y a mélange, n’est pas le même qui constitue le blanc d’œuf, ou le sérum du sang, ainsi qu’on en peut juger en comparant les pouvoirs rotatoires que j’ai rappelés.

Analyse immédiate dés matières albuminoïdes solubles du cristallin. — Berzélius et les auteurs qui l’ont imité ont opéré un peu rudement dans l’étude de la partie soluble du cristallin, comme dans celle des albumines en général. La coagulation, l’emploi des acides, l’évaporation même, si elle n’est pas faite avec ménagement, ne conduisent à rien de net et de précis. L’emploi de l’extrait de Saturne, qui a été essayé par plusieurs chimistes, peut conduire à de bons résultats, mais il y faut beaucoup d’attention. On sait que ce produit précipite le blanc d’œuf, et que M. Würtz, par son usage, en a isolé ce qu’il a cru être l’albumine pure et soluble; en réalité, il n’avait ainsi obtenu que l’une des matières que le blanc d’œuf contient. On sait aussi que l’on ne peut pas, par cet agent, précipiter la matière albuminoïde du sérum. Lorsque l’extrait de Saturne ne produit aucun précipité, l’extrait de Saturne ammoniacal

réussit quelquefois. C’est par ce moyen que j’ai isolé les autres matières albuminoïdes du blanc d’œuf et celles du sérum. Enfin, lorsque l’extrait de saturne ammoniacal lui-même est sans action, on parvient à le faire agir par l’intermédiaire ménagé de l’alcool. C’est ainsi que j’ai isolé la matière colorante rouge du sang. Les précipités albumineux formés dans les circonstances que je viens de citer sont aisément décomposables par l’acide carbonique , et presque tout l’oxyde de plomb est séparé à l’état de carbonate. Par ces moyens on obtient des matières toujours comparables , car, les agents employés ne possédant pas une grande activité chimique , on a beaucoup de chance d’obtenir les corps inaltérés, tels que la nature nous les offre, ce qui doit être la préoccupation constante de l'opérateur. Eb bien, cette méthode, qui réussit si bien pour l’analyse du blanc d’œuf, du sérum et de la matière colorante rouge du sang, ne convient pas pour l’analyse des matières solubles du cristallin.

Action de l’extrait de saturne. — La solution cristallinienne, dans le même état de concentration que pour l’analyse du blanc d’œuf, précipite très bien par l’extrait de saturne; mais le précipité est plus délié, moins opaque, et il m’a semblé qu’il fallait. moins de réactif pour atteindre la limite de précipitation. L’état du précipité est cause que la filtration et les lavages sont longs et difficiles. Les liqueurs, séparées du précipité, étant traitées par l’extrait de saturne ammoniacal, il se forme un second précipité très volumineux.

Les deux précipités ont été bien lavés et délayés dans l’eau pour en faire une bouillie claire , qui a été soumise à l’action cl’un courant très prolongé d’acide carbonique.

Chose digne d’attention: il n’y a pas eu de décomposition; les précipités sont restés aussi épais qu’auparavant. Après le traitement, la liqueur filtrée ne contient qu’une trace de matière organique, évidemment albuminoïde.

C’est là une première différence très caractéristique : à elle seule

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elle suffit, pour décider à ne pas confondre les albumines cristalliniennes avec celles dont on veut les rapprocher pour les identifier.

Ce fait est-il en rapport avec l’action que l’acide carbonique exerce sur la solution des matières solubles du cristallin ? Je n’ai pas essayé de le rechercher; mais il m’a semblé que l’acide carbonique n’avait formé que des traces de carbonate de plomb. D’ailleurs l’acide carbonique ne précipite pas tout dans la solution cristallinienne ! Pourquoi la portion qui n’en est pas précipitée n’est-elle pas isolée? Bref les choses se passent comme si les albuminates cristalliniens de plomb étaient indécomposables par l’acide carbonique.

J’ai cherché à tourner la difficulté. J’ai supposé que, si, d’après les recherches de M. Fremy, le cristallin contient deux matières albuminoïdes, l’une d’elles pourrait bien être une zymase. Or toutes les zymases que j’ai étudiées et isolées, comme la diastase, se redissolvent dans l’eau après avoir été précipitées par l’alcool. J’ai donc étudié l’action de l’alcool employé avec ménagement.

Emploi de l’alcool. — ■ Je suis obligé d’entrer ici dans beaucoup de détails sans l’exposition desquels la lumière ne jaillirait pas.

J’ai fait deux séries d’expériences. Dans la première j’ai opéré sur la totalité du cristallin; dans la seconde j’ai opéré, comme M. Fremy, sur les couches externes ou molles et sur les couches internes ou dures.

Totalité du cristallin. — Les liqueurs filtrées, après lavage aussi complet que possible des fibres, ont été traitées par l’acool à 85° cent., sans en employer un trop grand excès, mais de façon a obtenir une précipitation complète. Le précipité est très volumineux, pas opaque, floconneux et caillé comme celui de l’albumine coagulée, mais gélatineux a peu près comme un précipité d’alumine. Si aussitôt que le précipité est formé on y ajoute de l’eau, tout se redissout instantanément, ce qui est bien différent de ce

qui arrive pour le blanc d’œuf ou les albumines qu’on en isole ou pour l’albumine du sérum; dès que l’alcool les a précipitées, elles sont devenues définitivement insolubles . Mais bientôt on s’aperçoit que la quantité de matière soluble diminue rapidement. Dans cet état on a jeté sur le filtre, et constaté que l’alcool ne troublait plus le liquide filtré. Le précipité a été longtemps lavé avec de l’alcool à 80-82° cent., après quoi il a été bien essoré et délayé dans l’eau; ; la bouillie obtenue n’est pas blanc mat comme le serait une masse semblable d’albumine coagulée ordinaire, mais opaline comme l’alumine dans les mêmes circonstances. Le mélange, jeté sur un filtre, a été lavé à l’eau tant que quelque chose entra en solution.

Propriétés de la partie soluble dans l’eau du précipité formé par l’alcool. — Les liqueurs du traitement précédent ont été concentrées à l’étuve à 4o-4Ô°. Les liqueurs concentrées sont légèrement opalines; étant filtrées, elles sont aisément observables. Trouvé :

ai=2°,22\, /t=*2, V = 1 occ,

p = o®r, 2o4i cendres oSr,oo6, [a|y = 54°,4'\-

Était-ce là une matière unique ? Pour m’en assurer, j’ai reprécipité la solution par l’alcool, etc. Le précipité essoré étant repris par l’eau, tout ne se dissout pas; il y a encore un léger résidu. La solution, convenablement concentrée à 4o-45°, a fourni le résultat suivant :

o,- = 2°,66\, /= 2, v = 5CC, p == o8r, 1 3 6 , cendres osr,ooo8, [a]j = 48°, 9^.

Le pouvoir rotatoire a diminué. Je note que la solution, avec cette concentration, commence à se coaguler en flocons à 6i°; la coagulation est complète à 75°, et les flocons s agglomèrent.

La solution a, une fois de plus, été précipitée par l’alcool, etc.

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Le précipité essoré étant repris par l’eau, presque tout se dissout; mais il y a encore un peu de matière insoluble. Le solution, convenablement concentrée à 4o-45°, a été observée. Trouvé :

CCj = 4°,22\, /=a,l>=5“, , p ==r o^r,2 4) cendres osr,ooo8, [a]7 = 430,9’\.

Le pouvoir rotatoire a encore diminué. Je n’ai pas poussé plus loin la précipitation , voulant conserver une partie de la solution pour des essais dont il sera parlé plus loin, et pour constater la fonction du produit, qui est réellement une zymase.

Couches externes et moyennes ou molles du cristallin. — La partie externe, séparée autant que possible de la partie centrale, a été traitée comme il vient d’être dit. La matière restée soluble après la précipitation par l’alcool et après quatre reprécipitations a donné , après concentration convenable de la solution :

= 2°\, /= 2, v = 5CC,

p = oS\ 1 2 3, cendres o^',oo5, [a]| 4°057T\-

Couches centrales ou dures du cristallin. — - La matière soluble obtenue comme précédemment, après deux reprécipitations par l’alcool, a donné une solution qui a fourni le résultat suivant :

a/=2°’3\, Z=a,v = 5“, p = oP',126, cendres oSr,oo5, [a]j = 45°,6sy.

Après avoir prélevé sur ces solutions la quantité nécessaire aux expériences dont il va être question, le reste a été évaporé à l’étuve à siccité. La matière sèche, réduite en plaques grenues, pesait 2 grammes; elle a été dissoute dans l’eau; une quantité notable de matière a refusé de se dissoudre, soit que la masse contînt encore d’autre matière albuminoïde, soit qu’il y ait eu coagulation partielle ; sur quoi il y aura à se prononcer plus loin. Quoi qu’il

en soit, la solution bien limpide a fourni le pouvoir rotatoire que voici :

«j = 3°, 5 5^\, l = à, = 5CC,

p = o^r, 2 o 4, cendres 0^,0009, [a] j = 4 1 °t 1

Le pouvoir rotatoire de la matière qui reste soluble après tous ces traitements peut donc être considéré comme étant égal

Dans ces conditions nouvelles , j’ai encore déterminé le point de coagulation de la matière dissoute. La solution contenue dans un tube de verre, la boule du thermomètre y étant complètement immergée, le tout a été chauffé dans un bain d’eau, dont la température a été progressivement élevée. Le thermomètre extérieur étant à 70°, l’intérieur marquant 55°, la liqueur a commencé à louchir; à 6o° les flocons ont apparu, à 70° la coagulation était complète.

De tous ces faits il résulte que la matière soluble du cristallin qui conserve sa solubilité après la précipitation par l’alcool est d’abord un mélange , qui finit par être réduit en un produit que l’alcool ne coagule plus, mais qui est coagulable à une température assez peu élevée.

De la fonction chimique de la matière qui reste soluble après la précipitation par l’alcool. — La solution qui a donné le pouvoir rotatoire 43°,9’\ contient une zymase. La quantité de matière soluble correspondant à environ vingt cristallins a été ajoutée à 2 0cc d’empois au 3oe.

La fluidification a été opérée lentement, mais complètement. Au bout de douze heures, à la température de 4o° à 45°, tout était dissous.

La liqueur étant portée à l’ébullition, la matière albuminoïde se coagule, et la solution filtrée a donné

aj = 6°,4/, J=2, ^5?c, p = 0^,076, [a]y = 2 io°,5/r .

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La solution se colore en bleu par l’iode ; elle contient deux modifications solubles de la fécule.

Dans une seconde expérience on a employé 8CC des solutions réunies avant la dessiccation; on les à ajoutés à 4 occ d’empois au 3oe. Moins d’une heure après, la fluidification était faite. Laissé réagir à la température de 4o-45° pendant seize heures. Par l’ébullition de la liqueur la matière albuminoïde se sépare en flocons, et la liqueur observée donne :

Mpü ^ = io“

p = oS‘,i53, cendres o&r,ooo5, [oc]y =19 6°^^.

La solution se colore en violet par l’iode , et elle réduit le réactif cupropotassique à l’ébullition; elle contient de la fécule soluble et peut-être de la gluco'se.

La matière qui possède le pouvoir rotatoire — 4 1 0 et la propriété de fluidifier l’empois de fécule mérite d’être désignée par un nom qui rappelle à la fois son origine et sa fonction. Il est vrai que son pouvoir rotatoire est le même que celui de la galactozymase de lait de vache, que j’ai trouvé égal à — 4o°,7- Mais, jusqu’à ce que l’identité soit établie soüs d’autres rapports, en suivant les traces de M. Fremy, je la nomme phacozymase, car crislallozymase serait un mot hybride.

Il reste maintenant à savoir si la matière qui est devenue insoluble dans la purification de la phacozymase , soit pendant l’évaporation, soit dans les reprécipitations par Falcool, est une modification de celle-ci ou une matière spéciale.

Tous les produits devenus insolubles de cette façon ont été réunis, èt je leur ai cherché un dissolvant. L’acide acétique à 3 ou 4 équivalents d’eau en est un. La solution se fait aisément, à froid pour les précipités récents, à une douce chaleur pour la matière desséchée. La solution parfaitement incolore et limpide a donné :

0ÿ = 3°,i\, 1=2, v = 5CC,

0 = o&r, 128, cendres o?r,ooi, [ct]j = 6o°,5'Ny

Mais le poids p déterminé par la dessiccation a i3o-i4o° de température est, comme nous le verrons plus loin, celui d’une combinaison acétique que la matière contracte et qui résiste à 1 action de la chaleur. Dans les conditions de la présente expérience , la combinaison acétique contenait 1 8 p. o/o d acide acétique. Si 1 on calcule avec cette donnée la quantité de matière active que contiennent les o&r, 1 2 8 du composé acétique , on trouve p' = oSr, î oô ; le pouvoir rotatoire devient alors [a|y = ■ — 7 3°, 8; c est cette valeur qui exprime le vrai pouvoir de la matière albuminoïde. Nous discuterons ce résultat; en attendant, il explique pourquoi le pouvoir rotatoire de la phacozymase diminue à mesure qu’on la débarrasse de la partie qui devient insoluble par l’action de l’alcool ou par la dessiccation.

Occupons-nous de la partie que l’alcool coagule.

Cristalbumine. — C’est le nom que j’attribue à la matière albuminoïde du cristallin que l’alcool rend peu à peu insoluble. Cette matière est celle que les chimistes ont surtout en vue, car elle est la plus abondante et la plus voisine de 1 albumine ordinaire. Le nom de cristalline lui conviendrait, mais ce nom a été donné au mélange que l’on obtient en coagulant par la chaleur la solution aqueuse du cristallin, et on l’a fait synonyme de globuline.

La cristalbumine est caractérisée par la propriété de devenir insoluble par l’alcool, mais peu à peu, et pas instantanément comme l’albumine de l’œuf ou du sérum. Elle est caractérisée, en outre, par cette autre propriété : la combinaison qu’elle contracte avec l’oxyde de plomb , lorsqu’on précipite la solution par 1 extrait de saturne, n’est pas décomposée par l’acide carbonique. Elle se distingue nettement des albumines du sang et du blanc d’œuf, en ce que sa combinaison acétique est facilement soluble dans 1 acide acétique à 3 ou 4 équivalents d’eau. Mais ce qui la distingue et la caractérise éminemment, c’est son pouvoir rotatoire.

Il est très difficile de la débarrasser de toute trace de phacozymase. Il faut la délayer dans beaucoup d’eau, filtrer et laver long-

temps, pour l’obtenir pure et d’un pouvoir rotatoire constant. Lorsqu’elle a été bien lavée, elle apparaît comme une masse gélatineuse opaline ; c’est cet état gélatineux qui rend son lavage aussi difficile que celui de l’alumine. La matière ainsi préparée et encore humide se dissout instantanément dans l’acide acétique à 3 ou 4 équivalents d’eau. La solution est parfaitement fluide, dépourvue absolument de viscosité; d’abord un peu fluorescente, elle devient parfaitement limpide si on lapasse sur un peu de charbon animal lavé à l’acide.

Pouvoir rotatoire de la cristalbamine. — La solution acétique a donné :

«j = 7°^7V /=2’ v=5cc>

p = oSr,2 63, cendres 0^,002, [a]j = ']o°,o5'*\.

Ce pouvoir rotatoire est celui de la combinaison acétique.

La même solution a été observée quelques jours plus tard; mai s la valeur de p a été déterminée en opérant la dessiccation dans le vide, sur la chaux vive, à la température d’environ 2.5?. J’ai obtenu :

a/~I70,44\, /=2, r=5œ, p = o£r,2 63, cendres 0^,002, [<*],/;= 7 o°, 8^.

L’évaporation dans le vide sec sur la chaux vive a conduit au même résultat, mais cela dépend de la durée; en effet, on peut obtenir pour p des valeurs différentes, plus fortes , alors même que la matière paraît très sèche, pulvérisable et dépourvue d’odeur acétique.

Encore une fois , la combinaison acétique n’est pas assez stable pour qu’elle puisse servir à la détermination rigoureuse du pouvoir rotatoire.

Comme c’est à la cristalbumine que j’ai d’abord appliqué la méthode générale décrite au chapitre premier, p. 6 1 , les détails suivants ne sont peut-être pas superflus.

La cristalbumine a été desséchée jusqu’à pesée constante entre 1 20° et 1 3o°. On dissout aussitôt i^'^oS de la matière dans l’acide acétique à 3 ou 4 équivalents d’eau; la solution se fait lentement à froid, et s’achève à ioo°. La solution, ramenée à i5°, n’est pas assez transparente; elle ne se clarifie pas parle repos; il faut la filtrer. Trouvé :

<fy = 5°,43\, |g= 2, v = 45cc, p=isr,703, 1—71°, 7\-

Pour contrôler ce résultat, la solution a été de nouveau observée le lendemain; p a été déterminé en évaporant 5“ de la solution et desséchant à 1 4o°. Trouvé :

aj=5°,54\, 1—2 , v = 5“, p = o£r, 202, [a]j = 68°,56\.

Comme on le voit, ce pouvoir rotatoire , qui est celui de la combinaison acétique, est presque aussi grand que le précédent. Cela ne s’explique que par une perte de matière , due à la filtration et que le volume filtré contient en moins. En effet, si nous considérons cette dernière opération, et si nous supposons quon en retranche l’acide acétique, la différence représentera le poids de la matière active i1). Le produit de la dessiccation contenait 1 5, î p. o/o d’acide C4H3 O3, HO. Or, si l’on fait la correction en retranchant de p =o&r,2 02 une quantité proportionnelle de C4H30\ HO, il reste p = 0^,172 et, si les autres données sont les mêmes, on a :

aj = 5°, 5 4\, / = 2 , v = 5C0, p' — o&r, 172, [cl]j = 8 o°, 5\.

Le pouvoir rotatoire ainsi calculé est vraiment le pouvoir rotatoire de la cristalbumine, ainsi que l’on va voir.

Si la combinaison acétique était de composition invariable , il suffirait de déterminer une fois pour toutes la composition de cette

en Une matière albuminoïde est une amide, ou un composé amidé, peu importe, qui fonctionne comme un alcaloïde. Or un composé acétique semblable aurait pour formule A, CTI3 0-, HO (A étant la matière albuminoïde). Si l’acide est enleve, A reparaît.

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combinaison et, à l’aide de la correction fondée sur cette invariabilité, on arriverait aisément au pouvoir rotatoire vrai, rapporté à la matière active elle-même. Mais on vient de voir qu’on n’ôbtient pas des résultats absolument comparables , même lorsque la dessiccation est faite dans les mêmes conditions de température. Bref, il faut dans chaque cas déterminer la quantité d’acide acétique de la combinaison, ou bien trouver un moyen de se débarrasser de l’acide , afin de pouvoir peser la matière active restée pour résidu. Or, nous le savons, cela est très facile , puisque l’eau détruit la combinaison et que l’acide acétique est volatil. Voici deux expériences qui démontrent cette destructibilité et permettent, sans analyse élémentaire, de se faire une idée des quantités énormes d’acide acétique que certaines matières albuminoïdes peuvent fixer.

0^,707 de matière séchée dans le vide jusqu’à poids constant sont dissous dans l’acide acétique. La solution étant concentrée à douce chaleur W, on achève de la sécher dans le vide sur la chaux vive. On l’y laisse pendant huit jours. Deux pesées à un jour d’intervalle étaient identiques. Poids du composé acétique oSr,834< La matière est incolore et en plaques adhérentes à la capsule ; elle est absolument dépourvue d’odeur. L’augmentation est de près de 18 p. 0/0 du poids de la cristalbumine employée et, si l’augmentation était due à l’acide acétique, le composé en contiendrait 1 5,2 p. 0/0. Or, en distillant les o&r,834 avec de l’eau, que l’on renouvelle aussi souvent que le produit distillé est acide , on trouve qu’il faut 2CC,25 de potasse au titre de 47/1000 pour la saturation de la liqueur acide distillée, soit o£r, 1 35 d’acide C4H3 O3, HO et i 6, 1 p. 0/0 dans la combinaison acétique. A moins d’un centième près, les deux résultats se confondent.

(1) On a donné, comme un des caractères de la caséine, de former des pellicules pendant qu’on en évapore les solutions , et l’on a conclu que l’albuminate de potasse était vraiment delà caséine, parce que la solution se recouvrait pareillement de pellicules pendant qu’on l’évaporait; eh bien! la solution acétique de cristalbumine forme également des pellicules pendant qu’on l’évapore à chaud. Dans le vide , la solution se concentre et devient sirupeuse , sans former de pellicules.

Voici une autre expérience qui donne la loi suivant laquelle se fait la décomposition par l’eau à la température de l’ébullition, et en même temps fait voir que l’acide fixé peut être plus abondant dans le composé si la dessiccation a été arrêtée plus tôt. La solution acétique de cristalbumine a été évaporée incomplètement, puis séchée sur la chaux vive. On a arrêté l’opération dès que la matière est devenue sèche et pulvérisable. Il y avait oZ‘,8 i de matière ; elle h’ avait plus qu’une imperceptible odeur acétique. La distillation a été faite au bain de chlorure de calcium dans un appareil dans lequel on pouvait renouveler l’eau sans l’ouvrir. On distillait chaque fois à siccité 6occ de liquide. La saturation des divers produits distillés a été faite avec une liqueur titrée de potasse contenant 47/1290. Voici les résultats :

Distillations. Eau. Potasse.

ir0 . 60“ . 3", 7

Potasse . 4 ,85 1

Soit, acide acétique C4H303, HO, o&r,2256. Ainsi, dans ce cas particulier, la quantité d’acide acétique fixé s’élève jusqu’à 27,85 p. 0/0.

Lorsque la dessiccation à i4o° est poussée très loin, la quantité d’acide retenu peut descendre à 10 p. 0/0 et au-dessous.

Il est visible, d’après ces résultats, que, si l’on ne peut pas prendre en considération le pouvoir rotatoire de la combinaison acétique, on peut détruire cette combinaison, et que, par l’action répétée de l’eau à la température de ioo°, on peut expulser la totalité de l’acide acétique quelle contient; par suite, le résidu du traitement, lorsque l’eau ne devient plus acide et que la dessiccation a ensuite été achevée à 1 4o°, représente le poids réel de la matière active que la combinaison acétique contenait.

Une nouvelle détermination du pouvoir rotatoire de la cristal- S.iv. éthalvg. t. XXVIII. — N" 3.

bumine a été faîte dans ces conditions. La solution acétique de la matière d’une nouvelle préparation a donné , après la destruction de la combinaison acétique :

aj = 4°\, ^= 2, v = 5cc, p = o&r, 1245, cendres oSr,ooo5, [a]j = So0^^.

Le poids p a été déterminé comme ceci : 5CC de la solution ont •été évaporés au bain de sable, dans une capsule de platine à fond plat, jusqu’à siccité complète. On a versé dans la capsule, à cinq reprises différentes, 5 “-d’eau; évaporé chaque fois à siccité et porté la température à i4o°. La première eau rougissait vivement le papier de tournesol; les suivantes, de moins en moins; la cinquième ne produisait plus d’effet sur le papier bleu sensible. Alors on fait la pesée sur une excellente balance, on incinère et l’on retranche le poids des cendres.

J’ai essayé de contrôler ce résultat en cherchant à déterminer le pouvoir rotatoire dans un autre dissolvant. La cristalbumine encore humide se dissout dans l’ammoniaque très étendue, lentement, mais complètement; malheureusement on ne peut pas obtenir de solutions concentrées. Telle que je l’ai obtenue, elle m’a donné, moyenne de dix lectures concordantes :

a/ = o0,95\, ? = 2, v = 1 0“, p = oSr,o62, cendres o&r,ooo5, [a]j = 76°, 6^.

La matière ainsi caractérisée méritait bien le nom que je lui ai donné, et l’on voit qu’elle ne peut pas être confondue avec la caséine.

Et maintenant tous les faits s’expliquent. 1 0 Le pouvoir rotatoire de la solution aqueuse directe du cristallin représente sensiblement le pouvoir rotatoire du mélange de phacozymase et de cristalbumine. 20 Si le pouvoir rotatoire de la phacozymase est d’abord trop élevé , c’est que cette matière retient un peu de cristalbumine en solution. 3° Si les produits insolubles que l’on sépare

dans les purifications de la phacozymase sont d’un pouvoir rotatoire plus faible que celui de la cristalbumine , c’est qu’ils retiennent un peu de phacozymas.

J’ajoute qu’il résulte de dosages qui ne peuvent être qu’approximatifs que, pour 3sr de cristalbumine, il y a environ ogr, 7 de phacozymase pure.

En résumé , la cristalbumine diffère de l’albumine de l’œuf de poule et de celle du sérum, non seulement par le pouvoir rotatoire et les autres propriétés déjà indiquées, mais aussi par l’action de l’acide acétique et de l’ammoniaque ; en effet :

1 0 Lorsqu’on essaye de dissoudre l’albumine du blanc d’œuf coagulée par l’alcool dans l’acide acétique à 3 ou 4 équivalents d’eau, il semble se faire une solution, mais elle est visqueuse comme une gelée. Il se fait bien une combinaison acétique, que l’on peut obtenir sèche, mais, même après avoir fait bouillir l’apparente solution, si l’on essaye de filtrer, peu de chose traverse le filtre, et celui-ci retient la combinaison sous l’aspect d’une gelée tremblotante.

20 La cristalbumine se dissout dans l’ammoniaque ; l’albumine coagulée s’y gonfle seulement.

Par rapport à l’acide acétique et à l’ammoniaque , c’est de la caséine que la cristalbumine se rapproche le plus; mais la caséine s’y dissout bien plus facilement, en y prenant l’aspect que prend la gomme dans l’eau.

Sur la matière des fibres cristalliniennes. — La masse insoluble du cristallin qui reste comme une bouillie sur le filtre , apres 1 extraction des parties solubles, se compose dun amas de fibres ou débris de fibres, de rares cellules et d’une foule de granulations moléculaires très petites. Les fibres sont composées de tubes creux qui contiennent sans doute de la matière albumineuse. Au microscope ces fibres ressemblent d’une manière étonnante au mycélium de certaines moisissures. Les masses insolubles de la partie molle sont plus difficiles à laver que celles de la parue dure. Les gra-

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nutations moléculaires sont plus abondantes dans la partie molle que dans la partie dure. MM. Fremy et Valenciennes ont noté que ces fibres ne décomposent pas l’eau oxygénée et ne possèdent pas cette propriété de la fibrine.

Contrairement à l’opinion de M. Kôlliker, j’ai observé que ces fibres se dissolvent aisément dans l’acide chlorhydrique faible (à i ou 2 millièmes). Les tubes se gonflent d’abord énormément, de façon qu’on ne les distingue plus sous le microscope; mais, si l’on ajoute de la teinture d’iode à la préparation, sur le porte-objet, ils deviennent de nouveau apparents, quoique déformés, avant de disparaître.

MM. Fremy et Valenciennes ont reconnu que les fibres cristalliniennes présentent la composition des substances albumineuses.

J’ai essayé de déterminer le pouvoir rotatoire de la matière de ces fibres, en opérant séparément sur celle de la partie externe et de la partie centrale.

Les deux matières ont été lavées à grande eau, par décantation et sur le filtre. Cette opération, très longue, doit être faite dans l’eau phéniquée ou créosotée. Le lavage étant complet, la matière essorée à été traitée par l’acide acétique à 3 ou 4 équivalents d’eau; elle se gonfle d’abord et se dissout en grande partie. Les liqueurs filtrées ne peuvent être observées qu’ après avoir été passées sur du charbon animal; alors elles sont d’une limpidité parfaite. J’ai trouvé pour la combinaison acétique séchée à i4o° :

Pour les fibres de la portion externe :

«j = 3°\, /=2,'w = 5cc,

p = osr, 1 1 6, cendres o&r,oo î, faL= 63°, 6^ ;

Pour les fibres de la partie centrale :

aj = 3°,<8i\, 1=2, v — 5CC, p = 0^,1 48, cendres oSr,oo2, [a]J- = 64°,36'\.

Il s’agit donc bien de la même substance.

Les deux solutions ont été réunies, concentrées à l’étuve et de nouveau observées; p a été déterminé par dessiccation à l’étuve sur la chaux vive jusqu’à poids constant. Trouvé :

a/- = 4°,67’\, /=2., v = 5cc, p = 0^,201, cendres o£r,oo2, [o]y = 58°, î^.

La combinaison acétique est variable comme celles des autres albuminoïdes. Pour avoir le poids de la matière active que contient p, j’ai opéré comme ci-dessus. Les pesées successives, après l’action de l’eau et dessiccation à 1 4o°, ont été : osq 1 75 ; o&r, 1 70 ; 0sr, 1 55 ; oF, 1 55. L’eau ajoutée une dernière fois ne rougissait plus le papier de tournesol sensible. Séché encore une fois à i4o°, pesé et incinéré. Trouvé :

Oy= 4°, 67^, 1= 2, V=5œ, p = oSr,i53, cendres oSr,oo2, [a]j = 7 6°, -3^.

Ce pouvoir rotatoire est sans doute celui d’un mélange, car les libres cristalliniennes sont quelque chose d’organisé , des tubes dont les lavages n’auraient pas enlevé tout le contenu.

J’ai dit plus haut que les fibres cristalliniennes disparaissent dans l’acide chlorhydrique très étendu. Après lavage complet, celles des couches superficielles et celles des couches profondes ont été séparément traitées par l’acide chlorhydrique à 2 millièmes. Il s’est fait une solution louche , qui a été filtrée. Il y a sans doute une différence de structure entre les deux sortes de tubes, car la filtration est plus rapide pour la solution correspondant aux fibres centrales. Mais cela peut tenir aussi à ce que les granulations moléculaires sont plus abondantes dans les couches molles. Quoi qu il en soit, les deux solutions chlorhydriques ont été précipitées par l’ammoniaque très étendue , qu’il ne faut pas employer en excès , car la séparation du précipité en serait rendue plus difficile. Malgré tout, le précipité se sépare plus facilement de la solution

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correspondant à la partie dure que de celle de la partie molle ; il est même nécessaire pour celle-ci d’ajouter un peu d’alcool au mélange. Enlînj’ai observé que le précipité relatif à la partie dure est plus opaque , plus blanc mat que l’autre , qui paraît plus gélatineux. Mais ce sont là des différences de peu d’importance, et les deux précipités , bien lavés à l’eau et bien essorés , ont été dissous dans l’acide acétique à 3 ou 4 équivalents d’eau. Les solutions, filtrées , incolores et limpides ont donné :

Pour le précipité de la partie molle :

W 4°,99\> Imàim&k

Pour le précipité de la partie dure :

CLj = 4°\, l = 2 '

p = o^,i 25, cendres oSr,ooo4, |a]J- = 8or'Y.

Dans les deux cas, p a été obtenu après cinq actions de l’eau et dessiccation à 1 4o°.

Ainsi, malgré quelques légères différences physiques, qui peuvent être accidentelles, la matière chimique des tubes, dans toute la masse du cristallin , est la même.

On ne manquera pas de remarquer qu’il y a une différence entre le pouvoir] rotatoire que je viens de déterminer et. ceux de l’opération avec la solution acétique des fibres en totalité. Il était naturel de penser que cela tenait, ou bien à quelque matière que l’acide chlorhydrique n’aurait pas dissoute, ou à quelque matière que l’ammoniaque n’aurait pas précipitée de la solution chlorhydrique. C’est cette dernière supposition qui a été trouvée la vraie.

Les liqueurs ammoniacales séparées des deux précipités que je viens d’examiner ont été concentrées au bain-marie. Le produit concentré , en partie coagulé , est traité par l’alcool. Les parties coa-

gulées et précipitées ont été recueillies et lavées à l’eau. La matière bien lavée, peu abondante, a été dissoute dans la plus petite quantité possible d’acide acétique à 3 ou 4 équivalents d’eau. La solution, incolore et bien limpide, a donné, après destruction de la combinaison acétique par cinq actions de l’eau et dessiccation à i4o°, le résultat suivant :

a j 7 8\’ l= 2 > ^ fn1 °CC’

p = o®r, 1 6, cendres nulles, [a]y = 550,6^.

Ainsi la partie des fibres cristalliniennes insoluble dans l’eau est un mélange. On s’explique ainsi pourquoi le pouvoir rotatoire de la solution des fibres en totalité est plus petit que celui du produit précipité par l’ammoniaque de la solution chlorhydrique.

Maintenant on peut se demander s’il s’agit là d’un terme de plus dans le cristallin. Mais, comme il importe de ne pas augmenter sans motif les entités, je ferai remarquer que ce dernier pouvoir rotatoire est sensiblement le même que celui du mélange de phacozymase et de cristalbumine qui a été signalé plus haut. Rien n’empêche donc d’admettre qu’un mélange de ces deux substances reste dans les tubes, et comme elles sont solubles dans l’ammoniaque, elles n’en ont pas été précipitées de la solution chlorhydrique.

Il nous reste à examiner si la substance que l’ammoniaque précipite de la solution chlorhydrique des fibres du cristallin est nouvelle et particulière. Son pouvoir rotatoire est le même que celui de la cristalbumine.

C’est ici un de ces cas embarrassants où se pose d’une façon impérieuse la question d’isomérie et d’espèce. L’analyse élémentaire et l’analyse des produits de dédoublement pourraient seules trancher la question. D’analyses élémentaires je n’ose pas en publier sans les avoir répétées et vérifiées. Comment en serait-il autrement lorsqu’on voit un chimiste français mettre en doute les analyses de MM. Dumas et Cahours, si souvent vérifiées et sur

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lesquelles, en les confirmant, M. Lieberkühn avait pu se fonder pour essayer de fixer la formule et l’équivalent de l’albumine ?

Pourtant, si cette matière, par sa destination comme par son insolubilité naturelle, n’est pas la même substance que la cristalbumine ou n’en est qu’une variété , elle mérite un nom qui rappelle au moins son origine : je lui donne celui de cristalfibrinine.

En résumé , le cristallin contient trois matières : deux naturellement solubles, qui sont nettement distinguées par leurs pouvoirs rotatoires , et l’une par sa fonction spéciale de zymase ; une insoluble , dont le pouvoir rotatoire est le même que celui d’une des matières albumineuses solubles que je viens de rappeler.

Que ces matières soient de nature albuminoïde, cela ne saurait faire aucun doute. Les analyses élémentaires qui ont été faites de la matière soluble coagulée dans sa totalité, celle qui a été faite par M. Fremy de la plus soluble , qu’il a nommée métalbamine , et qui probablement n’était autre que la pbacozymase, répondent à la composition générale des matières albumineuses. Pour ce qui est des libres, elles n’ont été analysées que par M. Fremy; il a trouvé quelles présentent la composition des mêmes matières, mais il estime que leur substance ne saurait être confondue avec elles. Après une telle autorité, il faut suspendre son jugement. L’analyse de la cristalfibrinine et son étude plus attentive pourront fixer la place qu’elle doit occuper.

Il y a une particularité très digne d’attention, relative à toutes les matières cristalliniennes dont j’ai déterminé les pouvoirs rotatoires : c’est la difficulté d’obtenir avec elles la coloration bleue ou violette que l’albumine donne si facilement avec l’acide chlorhydrique fumant. M. Fremy a même observé que cette coloration ne se manifeste ni avec la métalbumine ni avec l’autre albumine. Elle ne se manifeste pas, en effet, lorsque le traitement est fait à froid. J’ai mis beaucoup d’insistance à réaliser cette réaction. Pour que la coloration se produise, soit avec la phacozymase, soit avec la cristalbumine , il faut les dissoudre dans un grand excès d’acide chlorhydrique fumant, à chaud, et porter

la solution à l’ébullition pendant quelques secondes. Alors la coloration violette se développe bientôt, nette et franche. Il en est de même des mélanges , dont le pouvoir rotatoire était — 54° et — 55°.

Quant à la cristalfibrinine , elle produit aussi la coloration violette dans ces circonstances, mais, toutes choses égales d’ailleurs, avec moins d’intensité. C’est un fait qui est favorable à la manière de voir de M. Fremy et qui impose la réserve.