ANALYSE ÉLÉMENTAIRE DE LA FIBRININE

La matière avait été lavée à outrance à l’eau , puis à l’alcool et à l’éther, enfin séchée dans le vide à 1 4o°.

I. oSr,g47 de matière laissent 0^,0016 de cendres, soit 0,168 p. 0/0.

II. oSr, 3 5 6 9 de matière , cendres déduites , donnent 0&1', 228 d’eau et oSr,685 d’acide carbonique.

ITT. oer,3245 de matière, cendres déduites, donnent 47“^ d’azote à 170 et à le gaz humide.

En centièmes.

Carbone . 52,34

Hydrogène . 7’° 9

Azote . 16,80

C’est la composition de la fibrine. Je trouve dans Ch. Gerhardt (t. IV, p. 466) l’indication suivante: « M. Baumhauer a confirmé les indications de M. Bouchardat quant a la solubilité partielle de la fibrine dans l’eau acidulée ; le précipité produit par le carbonate d’ammoniaque dans la solution a donne à 1 analyse :

Carbone. . .

Hydrogène Azote .

222 M. A. BÉCHAMP.

« La matière n’a pas laissé de cendres par la calcination. Les nombres précédents sont fort rapprochés de la composition de l’albumine. »

Ces analyses sont à reprendre' : je ne les donne qu’à titre de renseignements.

Sur la quantité d’acide acétique fixé par la jibrinine. — oSr,52Ô de fibrinine produisent oSr, 7 2 de combinaison acétique, par évaporation de la solution et dessiccation dans le vide sur la chaux vive. Par distillation, comme à l’ordinaire, j’ai obtenu :

Combinaison acétique . 0^,72

Acide acétique . . 0 i53

Acide acétique p. 0/0 . . 2i,3

Sur la quantité d’acide chlorhydrique que peuvent fixer la fibrine et la fibrinine.

I. Une solution de fibrine dans l’acide à 2,5 millièmes, opérée à 55-4o0 cent. , est évaporée et séchée sur la chaux vive dans le vide. La matière avait, par points, pris une teinte violette :

Composé chlorhydrique de fibrine . o8r,335

Chlorure d’argent . . 0 ^43

HCl correspondant . . . 0 ,o364

Acide chlorhydrique p. 0/0 . io,86

II. Solution chlorhydrique de fibrine précipitée par l’alcool et l’éther. Le précipité est complètement soluble dans l’eau; c’est

la solution qui a donné le pouvoir rotatoire — 69° ci-dessus. La solution, évaporée, séchée dans le vide sur chaux vive, etc. :

Composé chlorhydrique de fibrine . . o®r,652

Chlorure d’argent . . . 0 ,i-i

HCl correspondant . . 0 i02g

HCl p. 0/0 . 4,3

III. Fibrinine dissoute dans l’acide chlorhydrique à 2/1000, de façon qu’il y ait un grand excès de fibrinine non dissoute. Filtré. La solution évaporée et séchée dans le vide sur la chaux, etc. La matière sèche a l’apparence de la gomme :

Composé chlorhydrique de fibrinine . o6r,85

Chlorure d’argent . 0 ’°98

H Cl correspondant . . o ,02 36

HCl p. 0/0 . . . . 2,78

IV. La solution précédente , qui contient la combinaison chlorhydrique de fibrinine avec le moins d’acide possible , est traitée par l’acide chlorhydrique à i/5 d’acide fumant; il détermine la formation d’un précipité blanc qui se dépose en masse. Le précipité essoré sur porcelaine dégourdie est mis à sécher dans le vide sur chaux vive, etc. La matière sèche a l’apparence cornée :

Composé chlorhydrique de fibrinine . 2S%68

Chlorure d’argent . 0 >9°

HCl correspondant . 0 i23

HCl p. 0/0 . 8’58

La fibrinine forme probablement des composés plus riches en acide chlorhydrique.

La fibrinine se dissout également dans l’acide chlorhydrique fumant, et la solution chauffée se colore rapidement en beau violet.

Fibrimine et produits qui ne sont pas précipités par l’ammoniaque de la solution chlorhydrique de la fibrine.

Les eaux mères et les eaux de lavage de la préparation de fibrinine sont concentrées au bain-marie. Pendant 1 évaporation, il se sépare un produit coagulé; les liqueurs étant réduites à un petit volume, filtré pour séparer ce qui s’était coagulé. La solution, additionnée d’alcool, donne un précipité qui, lavé à l’alcool plus faible et essoré, se dissout en grande partie dans leau.

M. A. BÉCHAMP.

Il y a donc dans les eaux mères une matière qui se coagule et une matière qui reste soluble, même après la précipitation par l’alcool : c’est ce second produit que je nomme fibrimine. Ce produit ne préexiste sans doute pas dans la fibrine; on ne comprendrait pas qu’un produit aussi soluble existât dans un corps que l’on n’obtient pur qu’après de longs lavages.

Je dois dire qu’avant de distinguer la fibrimine dans le précipité que forme l’alcool dans les eaux mères concentrées, et remarquant que le produit ne se dissolvait pas complètement dans l’eau, j’avais cru que c’était là une albumine maintenue en solution grâce au chlorure d’ammonium, ou bien une modification de la fibrinine , rendue soluble ou maintenue en solution par ce même chlorure d’ammonium. C’est cette supposition qui m’a fait prendre le pouvoir rotatoire du précipité par l’alcool, en solution acétique. Trouvé :

a. Composé acétique, dessiccation à 100-1 io° :

« j = 2°>71\> /= 2’ «=iocc,

p = oSr,2 48, cendres o^oooÔ, [a]/-==540,5''sy;

b. Après destruction du composé acétique, dessiccation à 1 1 o° :

p = 0^,197, cendres o^,ooo5, [<x]y = 68°, g\.

Ce résultat, capable de faire illusion au sujet de la fibrine, écartait absolument l’idée de l’albumine. Mais il y a là un mélange dune matière soluble et d’une matière insoluble à pouvoirs rotatoires inégaux. Il fallait y prendre garde, car le mélange simule la solubilité ; il ne faut considérer comme fibrimine que ce qui est soluble dans l’eau, même après plusieurs reprécipitations. En général, sur environ 600 grammes de fibrine humide onn’obf tient guère que i&r,2 à i8T,6 de fibrimine pure.

Au lieu de concentrer les liqueurs et d’y appliquer la chaleur, ce qui peut modifier en quelque chose les propriétés de cette substance, on peut la précipiter directement par l’alcool. Mais pour obtenir par ce moyen une quantité notable de matière, il convient d’opérer au moins sur 3oo grammes de fibrine humide et d’user d’un artifice. Les liqueurs, séparées de la fibrinine, sont additionnées de 3 volumes d’alcool à g50 cent.; il se produit un trouble, mais la précipitation ne s’effectue bien que par l’addition d’une petite quantité d’acétate de soude en solution saturée. Le précipité est volumineux. Recueilli et essoré, repris par l’eau, il laisse un léger résidu insoluble. Une nouvelle précipitation par l’alcool fournit la matière soluble sans résidu.

Pouvoir rotatoire de la Jibrimine obtenue sans chauffer. — Deux produits de préparations différentes ont donné :

1° ai = 2°,22\, 1= 2 , V = 5CC, p = oSr,o64, cendres o&r,oi, [a]y = 86°, 7^;

20 a/- = 20,5'Ny, 1=2, v = 5cc, p = 0^,07 2, cendres 0^,01, [a]j = 87°, 3^.

La matière ainsi obtenue répand l’odeur de corne brûlée à l’incinération. Sèche , elle a l’apparence des matières albuminoïdes et se dissout dans l’acide chlorhydrique fumant; après avoir été chauffée , la solution se colore peu à peu en rouge mauve , qui passe rapidement au rouge brun.

Sur une propriété de la Jibrimine. — Si l’on ajoute à 3 o grammes d’empois au 3oeune solution de fibrimine ainsi préparée, contenant o?r,2 5 de matière, il se liquéfie au bout de douze heures à l’étuve (45-5o° cent.). Il ne se forme pas de glucose. La fibrimine possède donc la fonction zymasique, mais à un faible degré.

Sav. étrang. t. xxvni. — N” 3 . =9

M. A. BÉCHAMP.

Pouvoir rotatoire de la fibrimine obtenue des solutions concentrées par évaporation au bain-marie. — Après deux précipitations par l’alcool, la matière était devenue complètement soluble dans l’eau. Les produits de deux opérations ont donné :

i° aJ = 2°,6i\, l— 2 , î>=iocc, p — o^, 1 65, cendres 0^,0006, [«]/== 7 9°, 1

2° .flÿ = 4°,l\, l— 2, V=5°°, p = o?r,i3, cendres o^oooÔ, [à]j = 78°, 8\;

3° ay = 2°,8\, 1=2, Vf=5cc, p = 0^,084, cendres b8r,oo2, [a]y = 83°,3\.

Une préparation avec fibrine de porc a fourni, pour 3^,7 de fibrinine, à peine 0^,26 de fibrimine, qui a donné :

4° a/=i°,77\> ^=2, v= 10p — 0^,102, cendres o^,oooÔ, [a]j — 86°, 7^.

La matière sèche de ces opérations, étant chauffée avec l’acide chlorhydrique fumant, se colore en rouge mauve.

Sa solution ne coagule pas par la chaleur; elle donne un léger précipité par le réactif de Millon , et la coloration rouge se développe si l’on chauffe. L’acide nitrique ne la précipite pas, et la solution jaunit. Elle ne donne aucun précipité par l’acétate et par 1 acétate basique de plomb. L’acide métaphosphorique y détermine la formation d’un précipité notable, insoluble dans un excès, soluble à chaud dans l’acide acétique; la solution se trouble de nouveau par le refroidissement.

Remarque I. 11 convient de noter que le pouvoir rotatoire de la fibrimine est plus de la moitié plus petit que celui de la gélatine. MM. Dumas et Cahours ont observé que certain composé so-

lubie, isolé des produits de l’ébullition de la fibrine, ne saurait être confondu avec la gélatine. Était-ce la fibrimine ?

Remarque IL — Lorsque la dissolution de la fibrine dans l’acide chlorhydrique étendu est opérée , si l’on abandonne pendant longtemps le mélange fluidifié à lui-même , la quantité de fibrimine (ou du moins le produit soluble dans 1 eau) paraît augmentée en même temps que le produit, qui devient insoluble après la précipitation par l’alcool. Dans ce cas, la quantité de fibrinine paraît diminuée. La matière semblable à la fibrimine ainsi obtenue a donné :

x° a,j = (j0,ç)\, 1= 2, v = 5cc,

p = oSr,2i6, cendres oSr,oo2, [a]j = 79<Mr'V 2° o,- = 3°,i6\, 1=2, v = 5cc, p = 0^,098, cendres 0^,007, [a]y= 8o°,6^\.

La solution possède d’ailleurs tous les autres caractères de la fibrimine chauffée.

Sur les matières devenant insolubles dans la précipitation des eaux mères concentrées de la préparation de la fibrinine. — Ainsi qu on 1 a vu, la fibrimine est accompagnée d’un produit qui devient insoluble dans l’eau après la précipitation par l’alcool. Ce produit , qu’on pourrait confondre avec l’albumine coagulée , n en a pas les caractères essentiels; il est toujours plus ou moins soluble dans l’acide acétique , mais quelquefois si peu qu’il est impossible d en prendre le pouvoir rotatoire.

i° Une de ces matières a donné, après destruction de la combinaison acétique et dessiccation à i4o° :

a,-=i°,89\, î=a,t>=io“, p = oSr,i 33, cendres osr,ooo5, [otjy =71 °'Nsv-

228 M. A. BÉCHAMP.

2° Une autre, dans les mêmes conditions, a donné :

aj= l°,8(f\, 1= 2,V=10CO,

p = 0^,138, cendres 0^,002, [a]y= 68°, 4^.

3° Une autre préparation , après l’action très prolongée de l’acide à 2/1000, a donné, dans les mêmes conditions :

/) = osr,i4, cendres o&r,ooo5, [a]j = 89°, 2^.

Ces divers résultats expliquent comment il se fait que le pouvoir rotatoire de la fibrine est plus grand que celui de la fibrinine. Ils démontrent, en outre, qu’aucun de ces produits ne peut être confondu avec l’albumine ou la caséine, etc.

Et maintenant on comprend pourquoi Liebig a toujours soutenu que la fibrine était insoluble dans l’acide chlorhydrique. C’est que ce chimiste employait l’acide trop concentré , ou bien , si l’acide était Suffisamment étendu , qu’il négligeait l’intervention du temps et de la chaleur. On a vu que, lorsqu’à une solution de fibrine ou de fibrinine on ajoute de l’acide chlorhydrique plus concentré , il se produit une combinaison de fibrine ou de fibrinine et d’acide chlorhydrique, laquelle est insoluble dans l’acide chlorhydrique d’une certaine concentration, à 1/10 par exemple. Cependant l’acide chlorhydrique fumant dissout le composé ; mais l’eau , ajoutée avec précaution, détermine de nouveau sa précipitation.

Indépendamment de la fibrinine, de la fibrimine et des produits insolubles qui l’accompagnent, il y a des matières d’une plus grande solubilité que l’alcool ne précipite que dans des solutions plus concentrées; et, après cela, encore d’autres produits, que je n’ai pas examinés et que, jusqu’à nouvel ordre, je range parmi les matières extractives. C’est de l’étude de tout cela que ressort la démonstration que l’action de l’acide chlorhydrique sur la fibrine n’est

pas une simple action de dissolution, mais un phénomène de dédoublement.

Des granulations moléculaires ou produit insoluble de l’action de l’acide chlorhydrique étendu sur la fibrine. — M. Bouchardat a signalé le fait que la fibrine contenait une matière insoluble dans l’acide chlorhydrique très étendu. C’est ce que ce savant a nomme épidermose. L’observation de M. Bouchardat est exacte. Cette matière est constituée par quelque chose d’organisé , à quoi la fibrine doit deux propriétés assurément remarquables : celles de décomposer l’eau oxygénée, et de fluidifier l’empois de fécule.

La substance qui reste sur le filtre quand l’acide chlorhydrique a produit tout son effet recèle' des granulations moléculaires très petites, qui ne s’aperçoivent bien qu’à l’aide de l’objectif n° 7 à immersion de Nachet. Elles sont très nombreuses. Ces granulations, je les ai nommées microzymas de fibrine. On les retrouve dans le sang, où nous les avons signalées les premiers, M. Estor et moi. Outre ces microzymas, le microscope décèle des débris informes, sans doute des restes de cellules détruites. Le mélange qui les contient est grisâtre et un peu gluant. Pour les obtenir mieux débarrassés de matière soluble , la masse détachée du filtre a été délayée dans l’eau acidulée, passée par un linge fin et laissée déposer. Le dépôt, recueilli sur un filtre, y a été lavé à grande eau.

Certaines expériences antérieures m’ont porte à penser que la fibrine devait à ces granulations la propriété de fluidifier l’empois de fécule et de décomposer l’eau oxygénée. Il s’agit de le démontrer.

Action des microzymas de la fibrine sur l empois. Le produit insoluble de 60 grammes de fibrine humide, absolument lavé à l’acide et à l’eau, contenant les granulations moléculaires, est introduit dans 5o grammes d’empois au 3oe. A l’étuve (45-5o° cent.) la liquéfaction était complète seize heures après. Le surlendemain on pouvait même constater la réduction du réactif cupropotas-

230 M. A. BÉCHAMP.

sique, c'est-à-dire qu’jl s’était formé un peu de dextrine ou de glucose. Mais, ordinairement, l’action ne vaque jusqu’à la formation de la fécule soluble.

Comme témoins on avait mis en expérience, au même moment :

i° Dans 5o grammes d’empois, les granulations moléculaires et les bactéries extraites d’une fermentation butyrique, préalablement traitées par l’acide chlorhydrique étendu et par l’eau; 24, 36 ou 48 heures après, il n’y avait pas encore de fluidification.

v 2° La fibrine de la même opération, 4 gr. , dans 5o grammes d’empois, avait déterminé la fluidification quelques heures après, dans les mêmes conditions de température.

3° Antérieurement , on avait mis 3 grammes de fibrinine bien lavée de la même opération, encore humide, dans 5o grammes d’empois, dans les mêmes conditions. Le mélange ne se fluidifia pas , même au bout de quarante-huit heures et d’avantage.

Il est utile, pour éviter les complications, de créosoter les mélanges.

L’action fluidifiante de la fibrine appartient donc aux inicrozymas quelle contient.

Granulations moléculaires de fibrine de chien. — Il importait de vérifier que les granulations moléculaires de la fibrine de carnivore possèdent la même propriété de fluidifier l’empois. Celles que l’on extrait de la fibrine de chien exercent peut-être avec plus d’intensité l’action fluidifiante que celles d’herbivore. Deux heures après, l’action était commencée, et le lendemain la solution était limpide. Filtré et observé :

aj = 7°,iy^, /= 2, v=5cc, p = oSr,o84, cendres oSr,ooo5, [0^=21 i°,3y^.

C’est là le pouvoir rotatoire de la fécule soluble. La liqueur ne

réduit pas le réactif cupropotassique et se colore en bleu pur par l’iode.

La fibrinine de chien, employéè comme témoin, n’a pas agi sur l’empois.

Action des microzymas de fibrine sar l’eau oxygénée. — * La partie insoluble de la fibrine (ne cédant plus rien à l’acide chlorhydrique très étendu, absolument lavée à l’eau de façon que le papier de tournesol le plus sensible n’en soit plus rougi) étant introduite dans l’eau oxygénée à 1 2 p. 0/0 de bioxyde d’hydrogène , on constate aussitôt un dégagement de gaz; le dégagement gazeux a lieu au contact de chaque particule solide. Quand les microzymas ont été bien préparés, la décomposition est bien plus rapide que par la fibrine elle-même dans les mêmes conditions. J’ai vérifié le fait sur toutes les préparations de granulations moléculaires de la fibrine de bœuf ou de porc que j’ai faites.

Cette propriété des granulations moléculaires de la fibrine méritait d’être étudiée de plus près.

On pouvait d’abord se demander si elles la posséderaient dans toutes les circonstances où elles conservent, avec leur nature chimique , leur forme; ensuite, si cette propriété ne dépend pas de quelque matière innomée qui y adhérerait; enfin si, ces granulations contenant de la matière minérale, la propriété qu’elles possèdent ne serait pas attribuable à cette matière. Voici les réponses à ces objections.

En premier lieu , il paraît ressortir de quelques essais , que la solution acide de fibrine qui les contient ne décompose pas l’eau oxygénée. La condition pour que la décomposition ait lieu serait donc la neutralité du milieu relativement à l’acidité W.

En second lieu, quand on a porté les granulations à l’ébullition dans l’eau, pendant quelques secondes ou d’une minute à deux,

(1) C’est certain; en présence d’une quantité même très petite d’acide chlorhydrique, les microzymas fibrineux ne décomposent pas l’eau oxygénée; la fibrine elle-même n’en dégage pas l’oxygène dans un milieu acide.

232 M. A. BÉCHAMP.

elles ne décomposent plus l’eau oxygénée. Or on sait qu’il en est de même de la fibrine.

En troisième lieu, quand on épuise ces granulations, pendant qu’elles sont humides, par l'éther additionné d’alcool, on leur enlève un peu de corps gras et quelque autre matière, non autrement examinée. Lorsqu’on les a complètement épuisées de matériaux solubles dans l’éther, dans l’alcool faible , et encore dans l’eau, elles n’en décomposent pas moins l’eau oxygénée. La propriété est conservée quand on les dessèche complètement, ensuite, dans le vide, circonstance où elles gardent leur état pulvérulent; elles peuvent ensuite la posséder encore pendant fort longtemps.

En quatrième lieu, on peut constater que ces granulations moléculaires contiennent beaucoup plus de matière organique que de matière minérale et une grande quantité d’eau. Voici, en gros,

leur composition :

Granulations humides . 4^,42 7

Matière à ioo° . . o ,617

Eau par différence . . 3 ,810

Granulations séchées à ioo° . o ,617

Cendres . 0 ,017

Matière organique par différence . 0 ,600

Ces résultats exprimés en centièmes donnent :

Matière organique . j 1 3.553

Cendres . . . 0.384

Eau . . 86.o63

Quant au rapport de la matière organique aux cendres, dans le produit sec, il est, en centièmes :

Matière organique. . . . . 97.245

Cendres . 2.755

Il est difficile d’admettre que la propriété de décomposer l’eau oxygénée dépende de la matière minérale qui est ainsi dissimulée dans une grande masse de matière organique. D’ailleurs, puisque les granulations ne décomposent plus le bioxyde d’hydrogène après qu’on les a fait bouillir dans l’eau, et que cette opération ne détruit pas plus la matière organique que la minérale, il est évident qu’il faut chercher ailleurs la cause de cette singulière propriété.

Quant à la nature de la matière organique qui constitue ces granulations, elle est certainement albuminoïde. Celles qui ont été débarrassées de corps gras, etc., par l’éther, se dissolvent partiellement dans l’acide chlorhydrique fumant, en développant une coloration rouge violacé. En ajoutant de l’eau à la liqueur, lorsque la coloration est développée , on voit se former un précipité blanc, comme dans une solution de fibrine dans les mêmes circonstances.

La propriété de décomposer l’eau oxygénée serait-elle une propriété de cette matière albuminoïde, considérée en elle-même comme un composé chimique? Mais alors pourquoi l’application de la chaleur la supprime-t-elle? Pour moi, je crois que la propriété appartient à la granulation moléculaire en tant qu’organisée. S’il en est ainsi, on comprend très bien pourquoi la fibrinine, qui représente la plus grande partie de la matière de la fibrine, ne décompose pourtant pas le bioxyde d’hydrogène.

Pour compléter l’histoire de la fibrine, il faudrait traiter de son origine et des matières albuminoïdes qui se produisent pendant quelle se putréfie : ces deux sujets seront exposés dans un chapitre spécial.

Sav. étuang. t. XXVIU. — N' 3.

M. A. BÉCHAMP.