CHAPITRE NEUVIÈME

MATIÈRE COLORANTE Dü GLOBULE DU SANG DE BŒUF. - GLOBULINE.

Je ne me propose pas de faire l’histoire des travaux dont le globule sanguin a été l’objet. Je veux seulement exposer l’état actuel de l’opinion des chimistes au sujet de la matière colorante de ces globules.

Les chimistes et les physiologistes ont beaucoup varié sur la constitution et la nature des matériaux constitutifs du globule sanguin. Berzélius a considéré le contenu des globules rouges comme formé d’une matière albuminoïde, supposée incolore, qu’il a nommée globuline, et d’une matière colorante rouge, Y hématosine de Le Canu ou de M. Chevreul.

LehmannW, en 1 853, considérait dans le globule sanguin, abstraction faite de la graisse, des matières extractives, etc., et des matières minérales , ces deux substances dans le rapport suivant :

Hématosine . , . 16.75,

Globuline et membranes . . 282.22

En i855, le même physiologiste^ remplace le rapport précédent par les suivants :

Hématosine . 16.75

Hématocristalline . . . . 241.07

Membranes cellulaires . ; . 4 1.42

De façon que Lehmaun a considéré, avec Berzélius, la partie

Lehrluch der physiologischen Chemie, t. II, p. i3.

(s) Précis de cjiimie physiologique ; traduit par Drion, p. 1 15.

albumineuse du globule sanguin comme un mélange d’une matière incolore, nommée globuline et plus tard hématocristalline :1a matière que Funke nommait cristaux du sang. Aujourd’hui on nomme hémoglobine la matière colorante rouge du sang; on la suppose associée, dans le globule, avec d’autres matières albuminoïdes, avec la lécithine, etc. Il n’est plus question de globuline.

M. Dumas W. a publié une analyse des globules rouges qui doit être Rapportée. Après un traitement approprié, destiné à enlever ce qui n’est point albuminoïde , déduction faite des cendres , les globules rouges contiennent :

Femme.

Chien.

Lapin.

Carbone . .

Hydrogène.

Azote .

Cette analyse

doit être rapprochée de l’analyse

3 de l’hématocris-

talline par Lehmann (cendres déduites) :

Carbone . .

Hydrogène .

Azote .

Soufre . . . .

Ces deux analyses convergent vers l’identité; de façon que la matière organique des globules rouges, dans la totalité, a la même composition que ce que Lehmann considérait comme la matière incolore par laquelle il avait remplacé la globuline de Berzélius.

M. Dumas a fait suivre ses analyses des réflexions suivantes, qu’il est bon de rappeler.

« Il résulte, dit l’illustre chimiste, il résulte évidemment de ces analyses, comme on l’avait conclu des propriétés des globules du sang, que ces corps appartiennent à la famille des matières albuminoïdes. Si le carbone qu’ils renferment s’élève à un chiffre

Comptes rendus , t. XXII, p. 906.

M. A. BËCHAMP.

ua peu supérieur à celui de la caséine et de l’albumine, c’est que dans les globules rouges il existe une matière colorante bien plus corbonée qu’elle. »

Cette observation n’était pas superflue. Aujourd’hui on conteste à la matière la plus importante, au moins par sa quantité, du globule sanguin, à l’hémoglobine, la nature albuminoïde, parce qu’elle contient du fer. Cependant les analyses que l’on a publiées de l’hémoglobine, en y comprenant le fer et le soufre comme éléments constituants, représenteraient exactement l’analyse que M. Dumas a faite de la matière essentielle du globule, rouge. Il faudrait donc conclure que le globule rouge n’est pas essentiellement constitué par une matière de la famille des albuminoïdes.

M. Ad. Würtz s’exprime comme ceci :

« On désigne aujourd’hui sous le nom d’oxyhémoglobine la matière cristallisable qui forme la masse des globules rouges du sang. Elle ne doit pas être comptée au nombre des matières albuminoïdes. Elle s’en éloigne par sa composition, car elle renferme du fer au nombre de ses éléments, et, chose importante, de l’oxygène, avec lequel elle est faiblement combinée M. » fl y aura lieu de discuter cette manière de voir. Pour moi, je considère la molécule de l’hémoglobine comme un tout dans lequel le groupe chimique qui contient le fer est comme le groupe éthyle dans l’éthyloxamide ; or peut-on dire que l’éthyloxamide n’appartient pas à la famille des amides et même des oxamides ?

De ce que l’on peut isoler du globule rouge une matière rouge , soluble dans l’eau, que l’on nomme hémoglobine, il ne résulte pourtant pas, malgré la constance de la composition, que ce soit un principe chimique défini, pouvant avoir sa fonction propre, capable, comme tel, d’entrer en combinaison; ce pourrait êtré un mélange intime, à peu près constant, ou même constant (comme le tout qu’on appelle gluten , ou comme l’albumine du blanc d’œuf, qui sont pourtant des mélanges) , dans lequel la matière albumi-

(I) Traité de chimie biologique , p. 297.

noïde supposée incolore et soluble de Berzélius serait le dissolvant de l’hématosine, celle-ci étant elle-même dans le globule sanguin, sous la forme d’une modification soluble. Et cette supposition est justifiée par l’identité des résultats analytiques de M. Dumas, de Lehmann et de ceux dont ce que l’on a appelé hémoglobine a été l’objet. Le fait que l’hémoglobine n’est peut-être pas un produit défini, même quand on l’a obtenue sous la forme d’hématocristalline, résulte de son mode de préparation, des circonstances de cette préparation, de sa manière d’être dans plusieurs circonstances, et même de son analyse élémentaire , puisque la quantité de carbone, en centièmes, a pu varier de 52.85 à 54.87, c’est-àdire de 2 p. 0/0 W.

J’ai pensé que , si la matière colorante rouge du sang est une substance albuminoïde définie , elle pourrait bien contracter combinaison avec l’oxyde de plomb , comme d’autres matières albuminoïdes, et qu’on pourrait ainsi l’obtenir isolée par voie chimique, en tant que composé chimique , en vertu d’une fonction chimique déterminée; dans le cas contraire, que j’arriverais à isoler, par voie de précipitation, ce qui se trouve mêlé avec elle. La supposition s’est trouvée réalisable dans le premier sens, à l’aide d’un tour de main.

j Extraction de la matière colorante du sang , dans le sang défibriné. — Le sang de bœuf défibriné est délayé dans l’eau jusqu’au point où les globules rouges ne sont plus visibles au microscope. Alors on ajoute au mélange de l’extrait de saturne (du Codex français) de façon à séparer ce qu’il est capable de précipiter, sans en ajouter un excès, afin de ne pas redissoudre de précipité albumineux. La solution, bien exactement filtrée, est ensuite traitée par le sous-acétate de plomb ammoniacal (5 à 6 parties de sous-acétate pour une partie d’ammoniaque caustique de concentration moyenne) , aussi longtemps qu’il s’y forme un précipité. Celui-ci est

Traité de chimie biologique , p. 3o3.

Sav. éteang. t. XXVIII. — N" 3.,

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bien plus abondant que le premier. En procédant avec soin, il arrive un moment où la liqueur filtrée ne contient plus rien de précipitable dans ces conditions , et où il n’y a pas de plomb en excès dans la liqueur, ce dont on peut s’ assurer par l’hydrogène sulfuré. On filtre pour recueillir le précipité; il est rouge, mais il se décolore par le lavage; il contient les albumines du sérum. La matière colorante reste en solution, et la liqueur filtrée est d’un beau rouge, comme est la solution du sang lui-même. Au spectroscope elle donne les deux bandes d’absorption a et (S de ce que l’on nomme oxyhémoglobine, entre les raies D et E de Frauenhol'er, la plus étroite près de D, la plus large près de E. Chauffée à 6o°, elle commence à se coaguler; elle donne aisément les cristaux d’hémine lorsqu’on la chauffe avec un peu de chlorure de sodium et d’acide acétique cristallisable. — La matière colorante du sang n’est donc pas précipitable par l’extrait de saturne ammoniacal; en quoi elle se distingue de presque toutes les albuminoïdes solubles.

Voici par quel tour de main on la précipite elle-même, en combinaison plombique.

A la solution filtrée, bien limpide, on ajoute la moitié de son volume environ d’alcool à 4o° ou 45° cent. Le mélange reste absolument limpide, lorsque les précipitations précédentes ont été exactement faites. Si l’on ajoute à cette nouvelle solution de l’extrait de saturne ammoniacal, il se produit un précipité rouge abondant, volumineux; et si la quantité d’alcool ajoutée a été suffisante, la précipitation peut être si complète que la séparation du précipité par le filtre fournit des eaux mères décolorées. Le précipité est recueilli et lavé à l’abri de l’air (sous une cloche garnie de chaux ou de potasse caustique) , avec de l’eau alcoolisée marquant 2 0° à 2 5° cent. Le précipité, lavé, délayé dans l’eau, est décomposé par un courant d’acide carbonique; la matière colorante est mise en liberté , possédant les caractères spectroscopiques qu’elle a dans le sang; le carbonate de plomb se dépose incolore. Nous reviendrons tout à l’heure sur les propriétés de cette matière et sur sa composition.

Extraction de la matière colorante des globules eux-mêmes. — Les globules sont précipités du sang défibriné par le sulfate de soude, selon la méthode connue. Pour obtenir les globules mieux débarrassés de sérum, j’ai employé 5 volumes de solution presque saturée à la température de io° à i 4° cent. , température à laquelle l’opération a été faite. Le mélange rutilant a été jeté sur plusieurs filtres, afin de séparer plus rapidement les globules et d’éviter le genre d’altération dont parle M. Dumas, sans avoir recours au courant d’oxygène destiné à conserver l’artérialisation des globules W. Les globules ont été lavés une fois avec la solution de sulfate de soude. Si toute l’opération a été conduite à sa fin dans l’intervalle de huit heures, les liqueurs filtrées sont incolores.

Dès que les globules sont égouttés, on jette les filtres dans de l’eau aérée froide pour les dissoudre; la masse est passée par un tamis fin, pour enlever le papier. On s’arrange pour que le volume de la solution fasse environ deux fois et demie le volume du sang employé.

La solution est traitée par l’extrait de saturne , très exactement, pour précipiter tout l’acide sulfurique du sulfate de soude, etc. On filtre avec soin; le filtre retient, avec le sulfate de plomb, les membranes enveloppes des globules. Lorsque la préparation des globules a été bien faite, la solution ne fournit pas ou presque pas de précipité par le sous-acétate de plomb ammoniacal. Quoi qu’il en soit, on ajoute un peu de ce réactif, pour précipiter exactement ce qu’il est capable d’en séparer, et l’on filtre encore. Alors on procède comme plus haut : ajouter à la liqueur la moitié de son volume d’alcool à 4 0-45° cent, et précipiter par le sousacétate ammoniacal, etc. Je n’ajoute que les observations suivantes. Il vaut mieux, quand il ne s’agit pas de dosages, employer une quantité insuffisante d’alcool qu’un excès , car l’alcool trop concentré détermine la coagulation du précipité plombique , et 1 acide

(,) M. Dumas a noté que les globules, en cessant d’être artèrialisés , laissent échapper leur matière colorante. Pour éviter la désartérialisation , il fait passer un courant d’air dans le liquide, sur le filtre. ( Comptes rendus, loco cit.)

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carbonique ne le décompose plus. Il est aussi nécessaire d’employer le sous-acétate ammoniacal d’une alcalinité suffisante; le réactif trop peu ammoniacal précipiterait mal, ou ne précipiterait pas complètement. Quand l’opération a bien réussi, le précipité est d’un beau rouge brique. Il est utile d’ajouter un peu de carbonate d’ammoniaque au moment de décomposer le précipité par l’acide carbonique; alors la précipitation du plomb est complète. On laisse déposer le carbonate de plomb à basse température , et une fdtration soignée fournit la matière , dans une liqueur, d’un très beau rouge. La solution offre d’ailleurs les bandes d’absorption caractéristique du sang artérialisé. L’expérience ne réussit bien qu’en hiver. En été , il faut opérer vite et sur de petites quantités pour obtenir un bon résultat. La solution peut être évaporée à basse température; la matière s’obtient alors en lamelles couleur grenat. Elle se dessèche en s’altérant, mais en restant soluble, à une température de 3o° à 4o°.

Ce que je vais rapporter de ses propriétés est relatif à la solution qui donne les deux bandes d’absorption du sang artérialisé , ou de ce que l’on a nommé oxyhémoglobine.

La solution qui contient 5 à 6 p. o/o de cette substance commence à coaguler à 55° cent.; la coagulation est complète à 65- 67° cent. Si la solution est plus étendue, la coagulation ne commence qu’ci 62° et n’est complète qu’à 720.

La solution précipite par l’alcool, et la matière en est coagulée. Le précipité est d’un beau rouge. Les liqueurs alcooliques décolorées ne contiennent pas de matière albuminoïde. Le coagulum par l’alcool n’est pas muqueux, mais dur et friable; en séchant il reste rouge.