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a disparu et qu'on retrouve inattaqué tout le galactose introduit.
Cetie méthode de purification du galactose en dissolution daus l’eau de touraillons était rapide surtout lorsqu'on voulait obtenir une solution de galactose pur dans ce milieu nutritif. 1] suffisait d'évaporer au bain-marie le liquide et de reprendre par l’eau l'extrait débarrassé de l'alcool et d'une grande partie de sa glycérine.
Pour obtenir le galactose pur et cristallisé plus rapidement, j'ai modifié celte méthode.
Je cultivele Saccharomyces Ludiwigii dans l’eau de touraillons additionnée de 4 0/0 de glucose. La levure se développe et fait rapidement disparaître le sucre. On soutire alors le liquide fermenté qu'on remplace par une solution stérilisée de galactose dans l’eau distillée : la levure n’ayant pas été enlevée par le soutirage. Nous verrons à la fin de ce chapitre la méthode suivie pour soutirer aseptiquement le liquide de fermentation.
L'impureté principale. le glucose, disparait très vite sous l’action de la levure. Le galactose reste mélangé à un peu d’impuretés provenant de la levure. On évapore alors le liquide filtré en parlie el on fait cristaliser le galactose. Cette première cristallisation reprise par l'alcool concentré et chaud donne par le refroidissement un galactose très pur dont le pouvoir rotatoire est :
Per ce procédé on est loujours certain d'opérer avec du galactose exempt de glucose.
Procédés de dosage. — Avant d'aborder l’étude de la fermentation (lu galactose, je dois indiquer les procédés de dosage que j'ai employés.
J'ai dû effe-luer un assez grand nombre de dosages de sucre. J'ai opéré à l’aide de la liqueur de Fehling préparée d'après la formule de Pasteur. J’amenais les liquides à analyser à une teneur de 1 0/0 de sucre. Je notais la quantité de liquide sucré nécessaire pour décolorer 5 c. c. de liqueur de Fehling. Souvent je ne disposais pas d’une quantité suffisante de liquide sucré pour faire un dosage au saccharimètre.
Dosage d'un mélange de deux sucres. — Dans plusieurs expériences J'ai mélangé le galactose ou le lactose au glucose, ou au lévulose. ou enfin au saccharose. Comme la différence entre le
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pouvoir rotatoire du glucose et celui du galactose est peu considérable, j'ai dû renoncer à l'emploi du saccharimètre, de faibles erreurs dans la lecture pouvant entrainer des inexactitudes dans le dosage.
J'ai employé un procédé un peu plus long. mais qui m'a permis d'éviter de trop grandes erreurs.
On prélève d'abord une certaine quantité de liquide sucré et on y dose le sucre total au moyen de la liqueur de Fehling.
La seconde portion de ce liquide sucré est stérilisée, additionnée au besoin d'eau de touraillons et ensemencée avec le S. Ludivigir.
La fermentation finie, on détermine le sucre restant par un nouveau titrage à la liqueur cupropotassique qui donne le galactose restant. Connaissant la quantité totale de sucre et la quanuté de galactose restant, il est facile d'obtenir la proportion de sucre mélangé au galactose.
Quand dans le mélange de sucre se trouve du lactose, on remplace le S. Ludwigiü par une levure de bière très active qui laisse intact ce dernier sucre.
Il m'est arrivé de rechercher la proportion de deux sucres dissous dans un liquide renfermant un antiseptique. J'ai alors modilié un peu la méthode. On commence par cultiver Le S. Ludwigü dans l’eau de touraillons additionnée de 2 0/0 de glucose. La fermentation finie, on sépare la levure du liquide fermenté en opérant comme nous allons bientôt Pindiquer. On porte alors la levure développée dans le mélange des deux sucres préalablementstériisés et dilués de façon à diminuer l'influence de l’antiseptique. Après la fermentation, il ne reste plus que du galactose.
J'ajouterai que cette méthode a été préalablement expérimentée et les résuliats nous ont démontré l’exactitude des nombres à 1/50 près.
Dosage de CO? d’gagé. — Dans certaines expériences j'ai été obligé de doser directement la quantité de sucre fermenté en analysant la quantité de CO? dégagé pendant la fermentation. Dans des ballons d’un volume assez grand, de façon à ne pas avoir intérieurement une pression de plus de 3 atmosphères, la fermentation terminée j'introduisais le liquide à fermenter, Après stérilisation j'ensemençais, je faisais le vide dans le ballon au moyen de la trompe à eau.
